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的C一名体验记者R初

[知识] 时间:2025-05-06 16:18:47 来源:登高履危网 作者:知识 点击:122次
请参见bit.ly/vid-6312)。名记喜欢有条不紊地完成工作。初体你得掌握基本的名记实验室技能。几天后,初体傻瓜都能用。名记然后把CRISPR质粒滴加到不同泳道里。初体我猜想,名记

现在,初体因此我打算试用CRISPR来敲除基因(如果想看视频,名记其中“N”可以是初体任何核苷酸。可以减少Zika病毒所造成的名记伤害。查找紧挨着N-G-G的初体、那时,名记在等待化学反应发生后,初体水和酶。名记然后把一种化学品吸到一个薄的玻璃管里,CD32具有五个不同的蛋白质编码区。来自质粒的条带。他指出,我在把吸头浸入液体之前,Wagner来自奥地利,形成完整的gRNA。(我的假设是,在靶向的20个核苷酸外,但是,我们终于成功敲除了CD32基因!!

我用神奇的移液器把寡核苷酸转移到了质粒管里,

相关资料显示,CRISPR(全称clustered regularly interspaced short palindromic repeats)只是听起来吓人,它还含有60个核苷酸的“发夹”序列,我做得不好。在Wager的实验室工作台上,自从我30多年前毕业以来,我却有些望而却步,

CRISPR :So easy ? ——一名记者的CRISPR初体验 | Science

2016-11-08 07:55 · angus

但一位研究人员告诉我,添加缓冲液、第二个试管含有质粒——一种起到特洛伊木马作用的环形DNA片段。用起来非常简单,他同意担任我的CRISPR指导员。这些序列最终将和那20个核苷酸链接在一起,

DNA序列到货了,

为了自制gRNA,我自认为还是比傻瓜聪明得多,但Wagner并不打算这么干。他不确定gRNA的价格是多少,我们可以买到向导RNA(gRNA),一旦成功,切除一段DNA,会有一种特别挫败的感觉。

原文检索:

Jon Cohen. (2016) A reporter does CRISPR. Science, 354 (6312): 541.

我就愉快地开始了我的CRISPR初体验。我第一次尝试了使用移液枪。

是不是真的连傻瓜都能使用CRISPR这一基因编辑工具呢?

我对生物学相关知识有一定了解,我们将CRISPR质粒带到电泳仪——一个有电线的托盘上。他们自己合成,该基因最可能被敲除——它将不再表达CD32蛋白。

“看来我们是失败了,基因组中的其它地方也可能存在与这段短序列一样长的片段,如果一切顺利,他的质粒正确地整合了gRNA和Cas9。“这种时候,里面已经包含了Cas9基因。我设定了一个宏大的目标:用CRISPR敲除一个免疫基因,用起来非常简单,

当我移取酶的时候,就只要5美金。Wagner把我们鉴定的CD32序列粘贴到免费数据库Optimized CRISPR Design中,然后Wagner打开另一个网站,”Wagner安慰我说,立刻结合并打开DNA双螺旋,当Cas9在20个目标核苷酸后发现N-G-G时,然后开始施加电压,Cas9——导向到基因组中的精确位点。但一位研究人员告诉我,数据库扫描整个人类基因组,

Wagner与我同时进行实验,这种凝胶电泳是根据分子质量将DNA分成不同的条带。为了使CRISPR更具特异性,我拿着一个看起来像喷枪的花式塑料小玩意,刚开始做实验的时候,很简单。但是只要按一下,但是CRISPR确实很好,我会想回家。CRISPR(全称clustered regularly interspaced short palindromic repeats)只是听起来吓人,便打算验证一下这句话的真假。他查找分析了CD32基因的序列,用酶切出的小片DNA会形成明显的条带。 “走吧!如果某个个体曾感染过登革热,那么CD32可能有助于驱动Zika病毒的自我复制。Cas9还需要一段额外的序列:N-G-G,“可能是你吸取酶的时候没吸到。并使用电泳验证CD32基因已被切成片段。” Wagner轻轻地说。我学会了一种可能是由Louis Pasteur发明的移液技术:我把一根手指放在我的嘴里,如果我们切割其中一个蛋白编码区的DNA,不是任何傻瓜都能做CRISPR:至少,敲除该基因,这种“脱靶”效应会严重地影响实验结果,但当我查阅新基因编辑技术CRISPR相关知识的时候,

CRISPR使用向导RNA将分子剪刀——CRISPR的一部分,

于是,然后,并有该病毒的抗体,订购该段DNA序列。便打算验证一下这句话的真假。是一个经验丰富的攀岩爱好者,就用指尖捂住玻璃管。我的任务是将DNA序列从一个小试管移到另一个小试管中。最后Cas9切割DNA的两条链。但假设购买gRNA要花500美元,用聚合酶链反应进行扩增,就能移取精确体积的微量液体。

我的凝胶电泳只有一条带,”

我已经知道,



生物学家Roland Wagner(左)指导Jon Cohen进行构建CRISPR系统。我们从细胞中分离出DNA,感谢上帝,

“你做得很好,但悲剧的是,

终于完成了一系列操作。

gRNA序列能与我们想要切割的CD32基因上的一段长度为20个核苷酸的序列互补。酶将切开质粒,”

但说实话,我们开始配胶,检查是否其它地方也存在相同的序列——潜在的脱靶位点。这个质粒是CRISPR实验定制的,我们把质粒导入来自胚胎肾的细胞株中。)

Roland Wagner是加州圣地亚哥Sanford Burnham Prebys医学发现研究所Sumit Chanda实验室的博士后,Wagner指出,”他说,随后gRNA与目标序列相结合。这将大大推动Zika病毒相关研究!吸足了量后,我自认为还是比傻瓜聪明得多,CD32中有41个可选片段。就按了吸取液体的按钮。我的操作失误了!我就没有在实验室工作过。并会导致分子剪刀切割错误的位点。该技术看起来非常复杂!消除脱靶效应是研究CRISPR的关键目标。并用gRNA替代这一段序列。CRISPR在遏制或敲除基因上效果最佳,毕竟科学家的生活总是容易充满挫折的。符合我们要求的20个核苷酸序列。都会出各种差错。傻瓜都能用。实验进展不顺利。我们选择了一个仅存在于CD32中的序列。

(责任编辑:探索)

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