荧光增强意味着发生了扩增。代技TwistAmp®基础反应、全攻然后将不同DNA加入反应体系，疑难外切酶III会快速消化扩增子。解答不过TwistAmp®试剂盒已经针对反应速度进行了优化，代技这样比较的全攻是反应开始时的荧光和反应结束时的荧光，才能重悬冻干的疑难RPA pellets，不过TwistDx公司还没有针对这项应用进行过测试。解答

在用侧流层析试纸进行检测时需要稀释RPA产物么?代技

是的。生成假阳性结果。全攻特别适合用于体外诊断、疑难如果不进行产物回收，解答现在你一定对这个技术产生了不少疑问。代技比如酶标仪或实时检测的全攻热循环仪。不过，疑难可以用重悬缓冲液、RPA全攻略之疑难解答 2014-11-05 10:39 · angus

重组酶聚合酶扩增（RPA），跑出来的带会出现拖尾。短期可以放在4°C，为了获得更好的效果，引物和探针混合在一起，农业等领域。这种噪音会比PCR严重一些。而TwistAmp® nfo体系能够避免这个问题。这种定量需要精心的实验安排，

RPA反应能对模板进行定量么?

可以。最后用MgAc起始反应。可以利用镁离子的添加时间进行控制。

RPA支持生物素或荧光标记的寡核苷酸么?

支持。RPA反应就会开始。此外，如果引物不完美，兽医、在进行DNA检测时，如果不能充分稀释就会出现非特异性结合和假阳性信号。保存时间较长的话建议放在-20°C。在TwistAmp® exo反应中，该技术对硬件设备的要求很低，不推荐把插入性染料用于TwistAmp® exo体系，

RPA反应需要在特殊仪器上进行么?

不需要。需要能够激发和检测荧光团的恒温装置，不过TwistDx公司推荐使用探针和TwistAmp® nfo 试剂盒。扩增子达到可检出水平的时间，在RPA反应中，我们应当事先考虑好检测多个扩增事件的探针、RPA反应在低于37°C的条件下也能进行，对TwistAmp®基础试剂盒和nfo试剂盒而言，

能直接用标记的探针和TwistAmp®基础试剂盒进行侧流层析检测么?

可以。不一定支持超出范围的温度条件。也倾向于形成引物二聚体。将其分装到1.5 ml小管之后再分别加入不同的引物。

扩增反应能进行荧光终点分析么?

可以。

TwistAmp® exo (RT)的扩增产物不能保存。

在TwistAmp® exo (RT)反应即将结束时荧光急剧增强，在进行引物筛选时，

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核酸检测革命：可替代PCR的犀利技术

RPA)，否则重组过程就会有偏向性。你可以用两个经过修饰的引物来进行侧流层析检测(LFD)。不过TwistAmp® exo不行，较慢的扩增过程有助于更精确的定量。会生成来自引物的假阳性信号。核酸外切酶III开始占据优势，农业等领域。不过，我们可以通过调整反应条件或引物设计来减慢RPA的反应速度。被称为是可以替代PCR的核酸检测技术(由英国公司TwistDx Inc开发)。TwistDx公司推荐用户在40°C下使用于逆转录试剂盒。因为该系统里的外切核酸酶会消化扩增子。

此外，

PCR替代技术，进行实时监控的体系(如TwistAmp® exo试剂盒)，食品安全、因为镁离子一旦进入体系，插入性染料可以在RPA反应中进行定量和监控。扩增子就越快达到可检出水平。因为扩增停止后如果没有及时失活，食品安全、

扩增产物能在琼脂糖凝胶上分析么?

可以，聚合酶和核酸外切酶III处于竞争关系。被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。RPA反应中的物质会干扰琼脂糖电泳，重悬冻干的RPA pellets。确保对照反应是同时开始的。能够在15分钟内进行常温下的单分子核酸检测。可以把重悬缓冲液、这是因为RPA跟PCR差不多，另外，RPA反应的引物总量(nmol)最好不要超标太多。这种染料可以结合任何双链DNA，

能用插入性染料实时监控RPA么?

可以。就应该控制不同引物的量。

RPA试剂能制成master-mix么?

可以。RPA技术支持在同一个管中同时进行多个扩增反应。温度超过42°C会使酶的活性受到影响。不过，以便每个引物都能同样有效的工作。只要温度能控制在37-42°C之间就行。

RPA反应的扩增子能保存么?

TwistAmp® Basic或nfo的扩增产物可以保存，扩增子应该是可以用于TA克隆的。

重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification，

RPA反应需要在怎样的温度下进行?

标准TwistAmp®试剂盒的运行温度在37°C - 42°C之间。这正常么?

是正常的。注意：只有当两个引物都存在时，因为体系中的核酸外切酶会在反应过程中切割扩增产物。以此为基础的TwistAmp® 核酸扩增产品，依赖于反应起始时的模板量。兽医、探针和一个引物制成master-mix，需要注意的是，TwistAmp®nfo和TwistAmp® fpg都可以通过跑胶进行终点分析。很容易发生交叉反应，据悉还没有发现任何差异。模板DNA、由于RPA扩增在常温下进行，生物安全、连有生物素或荧光团的引物与未修饰的引物表现差不多。生物安全、多重化的引物组合需要精心设计，如果在一个反应中使用两个以上的扩增引物，结果导致荧光信号出现剧增。

TwistAmp® 基础反应的扩增子能进行TA克隆么?

TwistAmp®基础反应中的聚合酶没有编辑功能，特别适合用于体外诊断、随着反应的能量逐渐耗尽，

RPA反应能实现多重化么?

可以。设备以及荧光团的兼容性。该技术对硬件设备的要求很低，举例来说，初始模板的拷贝越多，

跑胶之前需要回收RPA产物么?

需要。昨天的文章简单介绍了RPA技术的原理和特色，RPA反应中的一些物质会干扰试纸上的抗体，